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PCR测定结果的临床意义
2010-05-25 15:25:52  作者:黄海芬  来源:本院

PCR测定结果的临床意义

皮肤科实验室  黄海芬

 

由剑桥大学提供的资料:对300余万份检测合格的血制品用PCR(即分子生物学)复测,发现有乙肝阳性47份、丙肝阳性10份,HIV1阳性2份。从这组数据可以看出,分子生物学检测确实缩短了感染的“窗口期”。正如一位教授说:PCR不是为解决某一个难题而产生的,很有意思的是,在PCR发明后,各种需要用PCR来解决的难题才一个接一个地出现在人们面前。

PCR通常可分为定性、定量检测。乙肝、丙肝、HIV1等用血清/血浆检测的病毒DNARNA一般为定量,而用“分泌物”检测的“各类病原体DNA”一般为定性,所以对PCR结果的分析有非常重要的临床意义。

我们的医生经常会遇到这种情况,对乙肝病毒携带者进行抗病毒治疗治疗前,PCR结果为2.8×107拷贝/ml,治疗两周后复查结果为1.3×107拷贝/ml,三周后为2.7×107拷贝/ml ,四周后为1.1×107拷贝/ml。很多病人一看到前两周那个检测值时信心大增,觉得治疗有效,接受继续治疗,可当检测第三次、第四次时,心里就产生矛盾了,甚至怀疑起检测结果是否准确了。对于这类检测结果,是由正常误差造成的。即使用最好的试剂、最科学的方法、最优秀的人员,在相同条件、不同时间去检测,所得到的值都不会完全一样,而该值却是在一定范围内波动的。所以在上述一组数字中,只有底数变化而指数不变,说明病人体内的病毒量是不变的,也就是说,可以分析该病人在使用抗病毒治疗一个月是没有效果的。HBV-DNA测定值一般分为三个档次:低值≤104,中值105106,高值≥107。≤104时,日常生活的接触一般是没有传染性的。病人只有在“完全停药”后,每隔一定时间进行检查,多次检测的值持续偏低或保持在一定范围时才可以判断治疗效果。为什么要强调“完全停药”呢?因为HBVHCV感染的患者,在抗病毒治疗过程中,可出现HBV-DNAHCV-RNA阴转情况,而停药后又可逐渐恢复到治疗前的检测值。因此,判断抗病毒药物是否能够彻底清除体内的病毒,还要结合其他检测指标。HBV-DNA作为一个动态观察参考值,不能单独左右临床对疾病总体状态的评估。事实上,现在的乙肝病毒还可以做基因分型,对于抗病毒治疗敏感的可能为B型,HBV-DNA值比较容易降低,预后较好;而C型抗病毒疗效差,预后也较差,其HBV-DNA值一般较高,也较易导致肝硬化、癌变等。

    那么, 用“分泌物”对“各类病原体DNA”进行PCR定性分析时又有什么要求呢?由于2002年以前,我国的PCR实验室没有进行严格规范的管理,曾一度造成不良的影响,以至现在很多医生仍然对PCR产生质疑。事实上,自从有了PCR,人类用分子生物技术攻克的一个又一个难题,这就足以证明它的重要性和可靠性。我院的PCR实验室已经通过国家临检中心的评估验收,目前主要开展的是对各类病原体DNAHBV-DNAHCV-RNA的检测。大多数医生都知道培养法是确诊致病菌的“金标准”。但是,培养法也受很多因素的制约,比如必须在应用抗菌药物前采集标本,奈瑟菌在保温条件下运送并及时接种,厌氧菌的培养要求就更高,否则就会出现假阴性,也就是即使有致病菌也培养不出来。细菌培养最重要的环节,就是防止标本在运送过程中细菌已经死亡。临床实践中,要完全做到这一点应该说尚有一定的难度。然而,用“分泌物”对“各类病原体DNA”进行PCR检测,无论是“活菌”或是“死菌”都同样敏感。问题的关键是怎样判读PCR检测结果“阳性”时,所反映的致病菌是 “活菌”还是“死菌”,也就是说,是临床治疗前还是临床治疗后。正确对待这个问题非常重要,这是临床诊断与实验室检测结果是否相符的关键。在治疗期间采集的“分泌物”标本,PCR检测结果“阳性”,很可能检测到的是已经死亡的“各类病原体DNA”。这不是PCR检测的技术问题,而是与标本采集的时间有重要相关。因此,用治疗期间采集的“分泌物”进行“各类病原体DNA”检测,其“阳性”结果只能说明体内仍然存在所测致病菌的“尸体”。如果要用PCR检测结果来判断疗效,必须在病人停药2周后才能取材复查。只要掌握好复检时间,PCR检测结果仍然可以用作治疗阴转指标。任何一种实验室检测方法的特异性和敏感性都是有限的,从标本采集、运送、储存到检测的整个过程都有它的特殊要求。临床医生无论在选择哪一种实验室检验方法时,都应该充分了解该方法的优点与缺点,进而采取有效的相应措施,才能得到自己预期的检测结果,否则将给自己带来很大的困扰,甚至对检验方法提出错误的质疑。

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